Biophysikalische Untersuchungen zur physiologischen Bedeutung des Prionproteins als Metalloprotein
Beschreibung
vor 20 Jahren
Além da doença de Creutzfeld-Jakob, ìons de cobre tem uma função
importante na pathogenese de várias outras doenças
neurodegenerativas, por exemplo M. Wilson, M. Alzheimer. Até agora
não exisitia nenhuma método para determinar a concentração desde
catíon em vivo. Por isso, a minha tése queria achar uma
possibilidade para medir cobre por meio de um microscópio ou
espetrômetro para seguir a corrente de cobre durante uma
depolarisação. O sucesso do uso de corantes fluorescentes para a
determinação de concentrações de cálcio nos últimos anos nos
encorajou procurar uma substancia que pode detetar especificamente
íons de Cu2+. Encontramos que a emissão de TSPP
(tetrakis-(4-sulfophenyl)porphine) na região de 645 nm reage muito
específico na presença de Cu2+ (KD = 0.43 ± 0.07 µM com pH 7.4).
Ela não monstra nenhuma reação com os outros maiores catíons no
cérebro, Ca2+ e Mg2+, ao contrário a emissão da maioría das
substancias analisadas diminuiu. Também, Zn2+ afeta a fluorescença
de TSPP, em outra régião do espétro (605 nm) com uma constante de
dissociação KD = 50± 2.5 µM (pH = 7.0). Com TSPP, monstramos
primeira vez que existe uma libertação sinaptosomal de cobre depois
de depolarisação. Além disso, nós comparamos a quantidade de cobre
libertada em camundongos sem (WT) e com (PrP0/0) a deficiência de
exprimir o proteina prion (responsável pela doençã de
Creutzfeld-Jakob). Achamos a mesma quantidade de vesiculas
libertadas em consequência de depolarisação (medido com a corante
FM 1-43), mas uma redução significante na quantidade de cobre
libertada dos camundongos Prnp0/0. Os resultados foram confirmados
de outro método independente, que se chama ICP-MS
(inductively-coupled-plasma mass-spectrometry). Com os resultados
experimentais, presentamos na tése também uma teoria que pode
descrever a função do prion: Assumimos que esta proteína toma o
cobre, que sai durante a depolarisação, e leva-o para o interior da
célula, não havendo perda. A perda de cobre na ausência do prion
seja também uma explicação do processo de CJD.
importante na pathogenese de várias outras doenças
neurodegenerativas, por exemplo M. Wilson, M. Alzheimer. Até agora
não exisitia nenhuma método para determinar a concentração desde
catíon em vivo. Por isso, a minha tése queria achar uma
possibilidade para medir cobre por meio de um microscópio ou
espetrômetro para seguir a corrente de cobre durante uma
depolarisação. O sucesso do uso de corantes fluorescentes para a
determinação de concentrações de cálcio nos últimos anos nos
encorajou procurar uma substancia que pode detetar especificamente
íons de Cu2+. Encontramos que a emissão de TSPP
(tetrakis-(4-sulfophenyl)porphine) na região de 645 nm reage muito
específico na presença de Cu2+ (KD = 0.43 ± 0.07 µM com pH 7.4).
Ela não monstra nenhuma reação com os outros maiores catíons no
cérebro, Ca2+ e Mg2+, ao contrário a emissão da maioría das
substancias analisadas diminuiu. Também, Zn2+ afeta a fluorescença
de TSPP, em outra régião do espétro (605 nm) com uma constante de
dissociação KD = 50± 2.5 µM (pH = 7.0). Com TSPP, monstramos
primeira vez que existe uma libertação sinaptosomal de cobre depois
de depolarisação. Além disso, nós comparamos a quantidade de cobre
libertada em camundongos sem (WT) e com (PrP0/0) a deficiência de
exprimir o proteina prion (responsável pela doençã de
Creutzfeld-Jakob). Achamos a mesma quantidade de vesiculas
libertadas em consequência de depolarisação (medido com a corante
FM 1-43), mas uma redução significante na quantidade de cobre
libertada dos camundongos Prnp0/0. Os resultados foram confirmados
de outro método independente, que se chama ICP-MS
(inductively-coupled-plasma mass-spectrometry). Com os resultados
experimentais, presentamos na tése também uma teoria que pode
descrever a função do prion: Assumimos que esta proteína toma o
cobre, que sai durante a depolarisação, e leva-o para o interior da
célula, não havendo perda. A perda de cobre na ausência do prion
seja também uma explicação do processo de CJD.
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