Klonierung und Charakterisierung der Caseinkinase-1a aus Neurospora crassa

Das Uhrenprotein Frequency (FRQ) wird in Neurospora crassa nach
seiner Synthese phosphoryliert. Die dafür verantwortliche(n)
Kinase(n) ist (sind) nicht identifiziert. In der Fruchtfliege
Drosophila melanogaster und im Goldhamster Mesocricetus auratus
werden Uhrenproteine durch Enzyme aus der Familie der Caseinkinasen
1 phosphoryliert (Doubletime, tau-Genprodukt). Im Rahmen dieser
Arbeit konnte die zur humanen Caseinkinase 1ε und zu Doubletime
(DBT) aus D. melanogaster homologe CK-1a aus N. crassa kloniert und
charakterisiert werden. Es wurde auch eine zweite zur humanen
Caseinkinase 1ε homologe Kinase - CK-1b - in N. crassa
identifiziert. Das für CK-1a kodierende Gen ist näher mit DBT
verwandt. Daher wurde CK-1a in E. coli als
Hexahistidinfusionsprotein kloniert, exprimiert und gereinigt. Die
gereinigte CK-1a ist in vitro aktiv. Sie phosphoryliert β-Casein
und unterliegt einer Autophosphorylierung. FRQ wird in vitro an
mindestens zwei Stellen von CK-1a phosphoryliert. Diese
Phosphorylierungsstellen liegen wahrscheinlich innerhalb der
PEST-Sequenzen von FRQ.