Entwicklung von zellulären Indikatorsystemen zur Identifikation von Modulatoren der HIV-1 Genexpression

Es wurde ein Assay-System auf Basis von Reporter-Konstrukten
entwickelt, dass eine Detektion der HIV1- Tat und Rev-Funktion auf
Einzelzell-Ebene ermöglichte. Dieses fluoreszenzbasierte System
wurde hinsichtlich seiner Eigenschaften untersucht und
charakterisiert. Es wurde gezeigt, dass es sich dazu eignet sowohl
die Tat- als auch die Rev-Funktion konzentrationsabhängig
darzustellen. Des Weiteren konnten bereits beschriebene Inhibitoren
der Rev-Funktion durch den Assay bestätigt werden, was die
Zuverlässigkeit des Testsystems belegt. Außerdem ermöglichte dieses
System in durchgeführten Versuchen eine Quantifizierung der
RNA-destabilisierenden Aktivität von INS-Elementen des HIV-Genoms.
Durch die Herstellung einer stabilen Zelllinie mit einem
entwickelten Reporter-Konstrukt und die Etablierung einer
Fluoreszenzmikroskopie- und FACS-basierten Auswertung der Daten
wurde die Grundlage für eine umfangreiche Suche nach Inhibitoren
der HIV-1 Genexpression gelegt. Im Laufe erster „Screenings“ nach
zellulären Inhibitoren der HIV-Genregulation wurden in einer
cDNA-Bank aus fötalem Hirn mehrere inhibitorisch wirksame
Kandidaten-cDNAs identifiziert. Damit konnte gezeigt werden, dass
zelluläre Faktoren potentiell dazu in der Lage sind regulierend
bzw. inhibierend in die HIV-1 Genexpression einzugreifen.